Определение активированного частичного тромбопластинового времени ачтв

Определение активированного частичного тромбопластинового времени ачтв

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВИРОВАННОГО ЧАСТИЧНОГО (ПАРЦИАЛЬНОГО) ТРОМБОПЛАСТИНОВОГО ВРЕМЕНИ (АЧТВ или АПТВ)

Определение АЧТВ – это базовая методика для исследования системы гемостаза. Она является ориентировочным тестом для выявления гипер- и гипокоагуляционного сдвига, контроля за гепаринотерапией при тромбозах, тромбоэмболиях и ДВС-синдромах различной этиологии, для диагностики гемофилии (дефицит факторов VIII IX XI), болезни Виллебранда.

Принцип метода. Определяется время свёртывания плазмы крови в условиях стандартизированной активации контактной фазы (эллаговой кислотой) и фосфолипидами (кефалином) процесса коагуляции в присутствии ионов кальция.

Реактивы:

  1. АПТВ-реагент – раствор, содержащий мозговые фосфолипиды, эллаговую кислоту, буфер и стабилизаторы.
  2. Хлорид кальция, 0,277% раствор.

Оборудование

1. Коагулометр, при его отсутствии термостат с прозрачными стенками;

2. Пробирки центрифужные стеклянные (пластиковые, одноразовые);

3. Автоматические дозаторы (пипетки стеклянные);

Подготовка биоматериала

Кровь для исследования забирают из локтевой вены в пластиковую или силиконированную пробирку, содержащую 3,8% раствор натрия лимоннокислого 3-х замещённого (цитрата натрия), соотношение объёмов крови и цитрата натрия – 9:1. Кровь центрифугируют при 3000 – 4000 об/мин (1200g) в течение 15 минут. В результате получают бедную тромбоцитами плазму, которую переносят в чистую пробирку и исследуют.

Центрифугирование должно проводиться непосредственно после взятия крови, отбор плазмы для исследования – сразу же после центрифугирования! Не допускается анализ плазмы крови, имеющей сгустки, гемолиз и полученной более 2 часов назад, а также замороженной плазмы крови!

Подготовка реагентов к работе

  1. Флакон с АПТВ-реагентом необходимо встряхнуть и оставить при комнатной температуре. Раствор с АПТВ-реагентом после работы можно хранить в холодильнике при 2 — 8оС до 30 суток.
  2. Часть раствора хлористого кальция надо отлить в пробирку и прогреть в течение 10 минут при 37о С. Во вскрытом, но герметично закрываемом флаконе раствор хлорида кальция следует хранить при 2 — 8оС до 30 суток.

Проведение анализа

I Коагулометрический вариант

  1. В кювету коагулометра внести 0,1 мл. исследуемой плазмы и прогреть её при 37о С в течение 1 минуты
  2. В кювету добавить 0,1 мл. АПТВ-реагента, имеющего комнатную температуру
  3. Через 3 минуты добавить 0,1мл раствора хлорида кальция (прогретого до 37о С), и зарегистрировать время свёртывания

II Мануальный вариант

1. В пробирку внести 0,1 мл. исследуемой плазмы, добавить в ту же пробирку 0,1 АПТВ-реагента.

2. Пробирку встряхнуть, поместить её в термостат с прозрачными стенками

3. Через 3 минуты к смеси добавить 0,1мл. раствора хлорида кальция (прогретого до 37о С) и включить секундомер.

4. Каждые 10 – 15 секунд пробирку необходимо доставать из термостата, наклонять в почти горизонтальное положение и наблюдать образование сгустка. Как только сгусток образуется, надо без промедления, выключить секундомер (этот пункт следует проделывать достаточно быстро; палец одной руки должен находиться на кнопке секундомера, а другой рукой надо доставать пробирку).

Рекомендация !

Отрабатывать технику выполнения методики надо до тех пор, пока разница между параллельными определениями в одной и той же плазме не будет превышать 10 секунд.

Норма:

Для коагулометрического метода: 24 – 39 секунд в зависимости от типа коагулометра

Для мануального метода: 28 – 42 секунды

Клинико-диагностическое значение

· Удлинение АЧТВ указывает на снижение свёртываемости (гипокоагуляция), чаще всего из-за дефицита факторов II, V, VIII, IX, XI, XII, что наблюдается при гемофилиях А, В, С, болезни Хагемана, Виллебранда, во II и III фазе ДВС-синдрома и применении гепарина.

· Укорочение АЧТВ свидетельствует о повышении свёртываемости (гиперкоагуляция) и наблюдается в I фазу ДВС-синдрома.



Источник: bioximia.narod.ru


Добавить комментарий